模板,是指作圖或設計方案的固定格式,有時也指DNA復制或轉錄時,用來產生互補鏈的核苷酸序列。模板是將一個事物的結構規律予以固定化、標準化的成果,它體現的是結構形式的標準化, 以下是為大家整理的關于碩士論文開題報告模板3篇 , 供大家參考選擇。
碩士論文開題報告模板3篇
碩士論文開題報告模板篇1
碩士論文開題報告
論 文 名 稱:
姓 名:
學 號:
專 業:
所 屬 院 系:
學院指導老師:
企業指導老師:
指導老師單位:
論文起止時間:
目 錄
1.選題背景及意義 6
2.國內外研究現狀及分析 6
3.研究目標及內容 6
3.1 研究目標 6
3.2 研究內容 6
3.3 研究方法與技術線路 6
4.系統解決方案及關鍵技術難點 6
5.預期成果及可能的創新點 6
6.論文工作計劃 6
6.1 論文工作計劃 6
6.2 本人工作內容 6
參考文獻 6
撰寫開題報告的注意事項 6
相關文檔 錯誤!未定義書簽。
開題報告內容撰寫要求
開題報告是學位論文重要的環節,用于向專業報告學生的學位論文所要研究的方向和課題。直接決定學生是否能正式進入學位論文的教學環節。依據學院培養大綱對論文的要求,針對我專業學生的特點,在總結其他專業和我專業學生在這方面工作的經驗,特給出本要求。以幫助每位學生有效地整理和組織相關資料,做好論文的開題報告。
本要求同時報告的書寫格式和排版規范,每位學生要嚴格遵守,養成習慣。
論文名稱:XXXXXXXXXXX
論文題目應準確、鮮明、簡潔,能概括整個論文中最主要和最重要的內容。通過題目能大致了解論文的研究內容、所涉及的學科范疇和應用領域。論文題目中所用到的詞應考慮到為檢索提供特定實用的信息(如關鍵詞),一般不宜超過25個中文字,若語意未盡,可用副標題補充說明。副標題應處于從屬地位,一般可在題目的下一行用破折號“——”引出。論文題目應避免使用不常用縮略詞、首字母縮寫字、字符、代號和公式等。
論文題目一般應包含“研究對象”和“研究范圍”,
論文題目結構形式為:范圍+對象+動名詞。
【報告的篇幅與組成】
開題報告字數在5000~8000字左右。也就是說,按照開題報告的正文用小四號字、1.5倍行間距的格式要求,開題報告的長度通常為6~9頁(圖形所占用的篇幅應該折算成為文字數),圖形使用較多的開題報告也不應該超過9頁。
開題報告內容的組織原則上可以由以下七個部分組成(包括但不限于):
1. 選題的背景及意義
2. 國內外研究現狀及分析
3. 研究目標及內容
4. 技術難點和可能的解決方案
5. 預期成果及可能的創新點
6. 論文工作計劃
7. 參考文獻
【注意】有些論文的課題背景是一個大型項目,開題報告內容可以從整個項目或者系統的角度來進行陳述。陳述是針對完成該項目可能遇到或者存在的問題,從系統架構設計到主要技術的選用,最后到如何用這些技術實現系統所需要的具體功能,就如何能夠解決這些存在的問題為全文的主線進行討論。使指導老師能夠通過上述內容對系統或方案整體的輪廓與功能有比較全面的了解,不能只涉及自己所做的工作內容。
每部分具體內容要求如下:
1.選題背景及意義
【內容要求】
撰寫本部分內容應該清晰的回答出如下問題:
1. 選題背景:
論文擬研究的題目(問題)背景來源或起因是什么?對來源或起因做出簡要描述。
選擇該題目的目的是什么?要解決什么問題?
2. 選題意義:
簡要說明所選題目的研究成果有何現實應用意義或理論指導意義?
【寫作要求和篇幅量】
本部分內容的文字宜精煉簡潔,要緊扣題目的內容,要從技術角度去描述,不要去講大道理或者基本概念。也不要涉及社會和經濟意義。該部分內容原則上不要超過大半頁紙。通常半頁即可。若論文是某個項目的一部分,要說明你在該項目中主要擔任何種工作。
【常見問題】
花太多的篇幅、對企業或課題背景作過多地宣傳性甚至廣告性的敘述,而對課題本身的技術性說明不清。
描述許多大家都明白的大道理。離題太遠。對背景課題本身未說清自己要做什么事情,要解決什么問題。
對意義的說明多為夸大性描述。
2.國內外研究現狀分析
本部分是開題報告的重點之一,用來確定你選題的依據是否充分,定位是否合適,通過這部分的說明,確定你所研究的課題是否有立足點。是否是一個真問題。
本部分內容是否能寫好,關鍵在于前期的文獻閱讀量和理解程度,實際上這部分內容是文獻綜述的核心。
【內容要求】
按照論文主題所涉及的技術領域和問題本身來組織本部分內容的撰寫。緊扣自己要研究解決的問題范圍,去了解(國內外)別人是怎么解決的,所選擇的現狀最好是近3—5年來的情況。簡要描述他們的采用的方法和技術,并對比分析這些方法和技術的優缺點。最后給出你的分析結論。最后的結論要能支持你的選題理由。
【寫作要求和篇幅量】
1. 針對自己選題所涉及到的技術、設計、方案以及其它方面的問題,說明當前該領域主要有哪些解決方案,以及這些方案在技術層面各自存在的問題與不足。尤其是分析清楚那些不足才能成為論文的選題依據。此外,非技術層面的原因如知識產權,掌握核心技術,購買成本,安全性,需求特殊性等非技術問題也可成為選題依據。
2. 本部分內容必須是與自己的選題直接相關的內容,無關的內容不要寫入。論述要簡明扼要,要客觀論述,不要亂用形容詞和隨意下結論。最好分為國外現狀,國內現狀和對比分析三部分寫。最后給出你的結論。
3. 通過前面的背景、意義與國內外現狀分析,在這里一定要總結出幾個與你的論文實現的目標直接有關的、現在還存在的問題。這些問題將成為你論文所要解決的核心!在后面的研究目標和實施方案中,除了具體的技術方案外,必須陳述所選方案是否能解決或者緩解這里的一個或幾個問題。
4. 典型情況下,本部分的篇幅不要超過一頁半,最多不超過兩頁。引文方式要按規范表示。
【常見問題】
由于文獻閱讀量不夠,不深入,或者選擇一些網站或雜志的泛泛的介紹性文章,所以,內容大而空,很淺顯。像一個知識普及的內容,與題目涉及的具體領域不沾邊。內容包羅萬象,上下幾十年,與題目有關和無關的東西都陳述出來,結果失去了寫這部分內容的目的與主題。隨意下結論。為了要表示本課題的有效性,缺乏有說服力的分析對比,或者分析對比的方式根本推導不出你的結論。
3.研究目標及內容
該部分是開題報告的重點,說明了你的論文要達到的目標以及要達到該目標需要做的工作內容。同時要描述一個可行的概要方案,包括技術難點,總體方案的設想等。這部分內容有內在的邏輯鏈:以研究目標為核心,研究內容要能支持研究目標的實現,關鍵技術是能否確保研究內容的得以成功完成的要件,解決方案融合了研究內容和所采用的技術手段,是確保研究目標的得以實現的合理方案。
作為開題報告的重點,本部分的篇幅不可太短,可以論述的詳細一些,能夠讓評審老師判斷你的研究前景,對你的研究方法給予切實的指導與建議。
3.1 研究目標【內容要求】 研究目標是說明本論文希望要達到的最終目的,目標的描述要簡潔明確,是可最終檢查的。例如。系統,軟件,工具,方案,模型,體系,方法等。
【寫作要求和篇幅量】研究目標要以簡潔、明確的技術性語言描述,最好能用一句話陳述完。讓人一眼就能定位你的目標。同時在這里還需要簡要說明目標完成后預期的結果,以及最后成果的主要特征或類型,便于總結驗證。通常幾行文字即可,不要作任何展開性的說明,也不需要任何解釋性的說明。最好不要超過150字。
【常見問題】把研究內容作為目標,寫了很多具體要做的工作在這里,結果不知道最終目標是什么。把一些性能指標甚至社會意義,經濟意義也放在這里,沖淡目標的核心描述。
3.2 研究內容【內容要求】該部分重點論述為達到論文的研究目標所必須完成的工作內容。即你必須要做哪些事才能達到你的研究目標。
【寫作要求和篇幅量】該部分的技術性較強,論述要準確,技術概念要清晰。研究的內容要緊扣研究目標,兩者之間要有技術上的關聯性、合理性和盡可能的完整性。
以 列條目+簡單說明 方式來論述達到研究目標需要完成哪幾項具體的工作。每個條目的說明不要超過150字。論述時要用盡量采用技術性的語言、概念和有關術語
【常見問題】研究目標和研究內容的循環論證;把解決方案的內容也在此說明;
把要采用的成熟技術、方法和工具本身也作為研究內容的一部分
3.3 研究方法與技術線路
【內容要求】為完成研究內容擬采用什么樣的研究方法、技術路線、實驗方案與策略來解決國內外研究現狀分析部分所提出的問題與不足,并進行適當的可行性分析。
【寫作要求和篇幅量】要保證你的研究方法,技術路線,技術方案與論文研究內容的關連性和合理性,并對這些對擬采用的方法手段可行性分析的重點。可以用圖形,流程圖,文字等方式來說明。一頁半到兩頁的篇幅為宜。
【常見問題】羅列所使用的技術、工具和方法,與研究內容和課題本身脫節,不是你經過分析以后的研究方法,技術路線、試驗方法;為何要采用這些方法,路線等的可行性說服力不足或與研究內容脫節,
4.關鍵技術難點及系統解決方案【內容要求】
1. 分析在進行研究過程中可能會遇到的技術難點有哪些,并分析論證這些難點的解決就能有效地完成研究內容,從而實現研究目標。
2. 給出解決這些難點的解決方案并分析其可行性
3. 描述為達到研究目標擬采用的整體解決方案,如系統架構,模型框架,體系框架等等。并分析整體方案的可行性。
【寫作要求和篇幅量】關鍵技術難點主要指技術層面上存在的、用現有普通直觀的方法不能解決的問題,而不是自己現在所缺少的某方面知識或技能。所有的分析必須準確,有說服力,并緊扣論文的研究目標和研究內容,不要泛泛而論。篇幅不少于兩頁。
【常見問題】把要采用的某種知識、技能,方法或者框架體系等等作為論文技術難點或關鍵技術。拿出一些標準的產品方案或框架體系作為論文研究課題的解決方案,與研究內容脫節。
5.預期成果及可能的創新點【內容要求】描述最終可供審核與檢查的目標成果,成果必須和研究目標一致。在這里可以簡單敘述成果的主要功能和性能指標。并說明成果的形式。(軟件,工具,系統,部件,等,方法,體系)
可能的創新點可以陳述自己完成的工作中與眾不同的特點。
【寫作要求和篇幅量】要求文字簡潔,清晰,最好用一句話來概括成果形式。功能性能列出主要的即可,不要展開解釋。可能的創新點要實事求是,沒有就不用寫。不超過300字為宜
【常見問題】把研究內容也作為成果;對功能性能做過多的描述和解釋。
6.論文工作計劃6.1 論文工作計劃
陳述完成整個題目的時間計劃及完成中期檢查與畢業答辯的時間計劃。不能簡單到只有通用的項目開發幾個階段的時間計劃安排,需要結合自己項目中的關鍵功能或技術的實現以及中期檢查、論文撰寫、畢業答辯等內容作出更詳細的計劃安排。最好以表格方式給出,以便于中期檢查時檢查完成情況。不要用你所承擔項目的計劃來代替。
6.2 本人工作內容
在這里給出完成整個系統目標的過程中,自己主要承擔的工作內容。
參考文獻參考文獻是自己在進行一個課題研究或者項目開發之前,對當前或同領域情況的調研是否充分、深入的具體體現。
【常見問題】參考文獻部分常常出現的問題是:①講教材作為參考文獻;②將網站內容作為參考文獻。網站內容由于僅代表網站擁有單位或者發表者個人的觀點,不具備學術性,因為不宜作為參考文獻,需要引用時,可以采用頁面底端的腳注方式說明觀點的出處。
碩士論文開題報告模板篇2
2018碩士論文開題報告格式1、畢業論文一律打印,采取a4紙張,頁邊距一律采取:上、下2.5cm,左3cm,右1.5cm,行間距取多倍行距(設置值為1.25);字符間距為默認值(縮放100%,間距:標準),封面采用教務處統一規定的封面。 2、字體要求 論文所用字體要求為宋體。 3、字號 第一層次題序和標題用小三號黑體字;第二層次題序和標題用四號黑體字;第三層次及以下題序和標題與第二層次同;正文用小四號宋體。 4、頁眉及頁碼 畢業論文各頁均加頁眉,采用宋體五號宋體居中,打印“河北大學xxxx屆本科生畢業論文(設計)”。頁碼從正文開始在頁腳按阿拉伯數字(宋體小五號)連續編排,居中書寫。 5、摘要及關鍵詞 中文摘要及關鍵詞:“摘要”二字采用三號字黑體、居中書寫,“摘”與“要”之間空兩格,內容采用小四號宋體。“關鍵詞”三字采用小四號字黑體,頂格書寫,一般為3—5個。 英文摘要應與中文摘要相對應,字體為小四號times new roman。 6、目錄 “目錄”二字采用三號字黑體、居中書寫,“目”與“錄”之間空兩格,第一級層次采用小三號宋體字,其他級層次題目采用四號宋體字。 7、正文 正文的全部標題層次應整齊清晰,相同的層次應采用統一的字體表示。第一級為“一”、“二”、“三”、等,第二級為“1.1”、“1.2”、“1.3”等,第三級為“1.1.1”、“1.1.2”等,具體格式要求詳見模板(模板從河北大學教務處主頁下載專區下載)。 8、 參考文獻 參考文獻要另起一頁,一律放在正文后,在文中要有引用標注,如××× [1],具體格式要求詳見模板 9、外文資料及譯文 外文資料可用a4紙復印,如果打印,采用小四號times new roman字體,譯文采用小四號宋體打印,格式參照畢業論文文本格式要求。 10、圖、表、公式 圖:a. 要精選、簡明,切忌與表及文字表述重復。 b.圖中術語、符號、單位等應同文字表述一致。 c. 圖序及圖名居中置于圖的下方,用五號字宋體。 表:a.表中參數應標明量和單位的符號。 b.表序及表名置于表的上方。 c. 表序、表名和表內內容采用五號宋體字。 公式:a.編號用括號括起寫在右邊行末,其間不加虛線。 b.公式中的英文字母和數字可以采用默認的字體和字號。 圖、表與正文之間要有一行的間距,公式與正文之間不需空行;文中的圖、表、附注、公式一律采用阿拉伯數字分章編號。如:圖2-5,表3-2,公式(5-1)(“公式”兩個字不要寫上)等。若圖或表中有附注,采用英文小寫字母順序編號。 11、標點符號 注意中英文標點符號的區別,不能混用。 l
碩士論文開題報告模板篇3
云南農業大學
碩士研究生個人培養計劃(二)
(學位論文開題報告及計劃)
題目:燈盞花指紋圖譜研究
學科、專業:
植物學
研究方向:
藥用植物的開發與利用
入學年月:
研究生姓名:
指導教師:
填表日期 2010年3月29日
說 明
1.開題報告在教研組、專業或系、院的范圍內舉行,須適當請有關專家參加。
2.本表用鋼筆填寫或打印,字跡務必清楚。
3.本表在第三學期內(中期考核以前)完成。一式四份(復印),交導師、碩士點負責人、分管研究生教育領導和研究生處(原件)。
一、 課題來源及選題依據(國內外研究動態、研究目的意義)
1課題來源
云南省中青年學術和技術帶頭人后備人才計劃(2009CI053)。
1.2 選題依據
1.2.1 燈盞花概述
燈盞花,為菊科植物短葶飛蓬Erigeron breuiscapus(Vant.) Hand.-Mazz.的干燥全草,主要分布于我國西南地區,其中98%左右分布在云南,是云南特有的山地中藥材。首載于《滇南本草》,現行《中國藥典》一部予以收藏。氣微香,味微苦,辛、溫。具有散熱解表、活血化瘀、通經活絡、舒經治癱、祛風除濕、消炎止痛等功效。
自1979年以來燈盞花已被制成針劑、藥片、膠囊等多種劑型應用于臨床。自20世紀80年代后期燈盞花的功效被進一步深入地研究,其制劑得到大規模開發。目前,燈盞花已被列為云南省重點開發中藥材,據不完全統計,云南省每年需夠約1000噸的燈盞花,楚雄州、紅河州、麗江等地區已對燈盞花進行大規模研發。
1.2.2研究現狀
1.2.2.1燈盞花的藥用價值
一、燈盞花藥理作用:
1.對器官血流和血流動力的影響:李玲等]研究發現燈盞花總黃酮能減輕異丙腎上腺素誘發的大鼠心肌缺血性損傷;燈盞花總黃酮100mg/kg能明顯低麻醉大鼠血壓,并不加快心率和增強心肌收縮力,對其它血流動力學參數影響亦不明顯。由于血壓下降,減輕了心臟負荷,從而降低了心肌耗氧量,射血阻抗降低,使心縮期相對縮短,舒張期相對延長,利于冠脈灌流,改善了心肌供血。
2.改善血液流變學:將燈盞花注射液40ml加入250ml液體中靜滴,1次/d,20d為一療程,用于治療缺血性腦病。結果能明顯降低血漿粘度、紅細胞聚集指數及紅細胞壓積(P均>0.05),TCD(經顱多普勒)的平均時速、頻譜、頻窗明顯改善。
3.改善微循環:燈盞花素對高分子右旋糖酐引起的動物大腦、軟腦膜及腸系微膜循環障礙都有明顯改善。其作用表現在舒張血管,降低血管阻力;血流加快,流態由粒流、絮流變為線流;另有試驗表明,燈盞花素可改善豚鼠耳蝸外側壁微循環。
4.對凝血功能的影響:動物實驗表明,燈盞花能夠明顯抑制缺血后血小板凝聚功能。
二、燈盞花的臨床應用:
1.用于治療心腦血管疾病:(1)冠心病心絞痛:燈盞花注射液治療冠心痛心絞痛有效率為88.9%,心電圖示心腦血流量和心肌血液供應增加,抑制血小板聚集,促進纖溶,抑制內凝血,舒張血管,使血流暢通,改善心肌缺血,并對缺血心臟有保護作用;(2)急性病毒性心肌炎:燈盞花注射液治療急性病毒性心肌炎,治療組在臨床癥狀消失時間、心電圖示sT-T與心肌酶譜CKMB2周末的恢復均優于對照組。(3)腦梗死:范華昌等對345例腦梗死患者使用燈盞花注射液治療,臨床癥狀改善總有效率為91.30%,對照復方丹參葉為75%;(4)腦血栓:周端求等用燈盞花片治療84例腦血栓患者,總有效率為95%,對照組72例給予維腦路通片,總有效率為80.5%,治療組明顯優于對照組。(5)腦出血:周國英等對30例高血壓腦出血急性期患者用清開靈及燈盞花注射液聯合應用。結果治愈8例,顯效17例,有效3例,無效2例,有效率達93%。(6)高黏學癥和高血脂癥:王淑娜等將113例高黏血癥患者分為治療組和對照組,治療組65例用燈盞花注射液,對照組用48例用復方丹參注射液。結果治療組全血黏度、血漿黏度、纖維蛋白下降顯著。
2.用于治療腎病:(1)腎病綜合癥:付秀蘭等對34例腎病綜合癥患者用燈盞花注射液治療后臨床觀察,治療后患者血黏度、Hct均有下降,較滿意地改善腎病綜合癥的高黏狀態,保護了腎功能。(2)急性腎小球腎炎:裘惠宣等對28例小兒急性腎小球腎炎患者用傳統常規治療同時加用燈盞花注射液靜滴,對照組25例用傳統常規治療,結果治療組總有效率為93%,對照組總有效率為80%,治療組明顯優于對照組。(3)腎功不全及腎功衰竭:付秀蘭等對25例腎功不全患者用燈盞花注射液治療,在緩解臨床癥狀,降低血液、血脂,增加尿量,改善腎功能等方面取得一定療效。(4)糖尿病腎病和高血壓腎病:廖慶兵用燈盞花注射液治療糖尿病腎病9例,高血壓腎病6例,結果除一例血尿毒氮、血肌酐未恢復正常外,其余14例均恢復到正常范圍,總有效率93%。
3.用于治療視網膜靜脈阻塞:沈金麟等對40例視網膜靜脈阻塞病人用燈盞花注射液治療,對照組20例用復方丹參滴丸注射液,結果燈盞花組平均視力提高0.29,丹參提高0.26。
4.用于治療老年癡呆及中風后遺癥:丁鈺熊等通過對老年大鼠腦功能試驗研究表明,燈盞花對老年大鼠延緩衰老有較好療效。
5.用于治療坐骨神經痛:羅明等穴位注射燈盞花注射液治療坐骨神經痛40例,取得良好療效。
1.2.2.2化學成分研究研究進展
燈盞花化學成分較復雜,現已從中分離鑒定出黃酮、吡喃酮、倍半萜、咖啡酸酯、酚類化合物50多種,目前仍不斷有新的成分被分離出來。
黃酮類化合物是燈盞花中主要有效成分之一,從已分離得到的黃酮類成分看,各種類型都有分布,包括黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮類等,其中又以黃酮類成分為主。主要包括野黃芩苷、燈盞甲素、5,6, 4′-三羥基黃酮-7-O-β-D-半乳糖醛酸苷、黃芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、黃芩素、3-羥基—7-甲氧基黃芩素、芹菜素、3,5,6,7,4′-五羥基黃酮、5,7,4′-三羥基雙氫黃酮等,存在形式為黃芩素及其衍生物,多在4′位上取代一羥基,但只在七位羥基處發生甲基化與苷化,這可能與七位羥基活性有關。
近幾年來從燈盞花中不斷發現新的咖啡酸類化合物,并經藥理學初步證明具有一定的活性,表明該類化學成分具有一定的代表性。主要包括咖啡酸乙酯、咖啡酰氧基環己甲酸甲酯、1,5-二咖啡酰氧基奎寧酸、1,3-二咖啡酰氧基奎寧酸、4,5-二咖啡酰氧基奎寧酸、3,4-二咖啡酰氧基奎寧酸、3,5-二咖啡酰氧基奎寧酸、咖啡酸甲酯等,從生源上看,咖啡酸類化合物與黃酮類化合物有密切的關系,在燈盞花中以多種形式存在,酰化位置并無一定性的規律。進一步研究與開發該類化學成分,對于進一步開發燈盞花有重要的意義。
1.2.2.3燈盞花質進展量研究
中藥質量評價技術是制約中藥學現代化與產業化的瓶頸。質量評價大致可分為兩個層次,首先是藥材真偽鑒別,目前主要技術手段為通過藥材性狀及顯微特征進行鑒別。對已確定的正品藥材,則面臨質量優劣評估。由于中藥化學成分復雜,功效眾多,且不同成分或功效相互影響。因此,藥材質量優劣判斷,其技術難度遠遠高于前者。
現行中藥質量(優劣)控制的基本模式是參照國外植物藥的質量控制方法,借鑒化學藥品質量控制的模式建立的。化學定性鑒別與指標性成分檢測室其主要內容。對于化學藥品而言,其分子結構清楚,構效關系明確,鑒別、檢查、含量測定可以直接作為療效評價的指標,但對于中藥,尤其是復方制劑,檢測任何一種活性成分均不能體現其整體療效,這是中藥與化學藥品質量標準的根本區別。目前,中藥的質控模式既難以有效地監控質量,也不能評價中藥質量,更難以反映其安全性和有效性。為此,今年國內研究者提出了多種解決方案。如謝培山認為中醫藥理論和實踐的非線性特點要求綜合評價中藥質量,分析化學由分解、微觀向宏觀、綜合分析轉變將成為必然趨勢。色譜指紋圖譜(圖像)分析是對中藥材及其制劑進行綜合宏觀分析的可行手段之一;羅安國等將多維信息特征譜應用于中藥分析鑒定中,建立中藥注射劑多維信息特征圖譜,希望能系統完整地解決藥效和質量相關性問題;屠鵬飛等提出建立反映中藥材整體信息的指紋圖譜,包括化學和基因指紋圖譜,并倡導積極建立中藥的GAP基地以從源頭進行質量控制。
目前,一般以燈盞花中野黃芩苷的含量為評價指標,用HPLC對燈盞花進行檢測。
1.2.2.4 指紋圖譜簡介及燈盞花指紋圖譜的研究進展
指紋圖譜是指中藥材或中成藥經適當處理后,采用一定的分析手段,得到的能夠標示該中藥主要化學成分特性的色譜或光譜的圖譜,是一種綜合的、宏觀的和可量化的鑒別手段。中藥指紋圖譜將成為一種用來對不同藥材種屬進行鑒別、對同種藥材質量是否均一;及其質量優劣進行評價的工具,己經獲得國際社會的廣泛認可,可以為中藥進入世界醫藥主流市場,參與國際競爭提供有力的支持。
目前,中藥指紋圖譜技術已涉及眾多方法,包括薄層掃描(TLCS)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)和高效毛細管電泳法(HPCE)等色譜法以及紫外光譜法(UV)、紅外光譜法(IR)、質譜法(MS)、核磁共振法(NMR)和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法,尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規分析手段。由于HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣等特點;中藥成分絕大多數可在高效液相色譜儀上進行分析檢測,且積累較豐富的應用經驗。因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術的首選方法。隨著HPLC—MS和GC—MS等聯用技術的應用,中藥指紋圖譜技術更趨完善。
將中藥色譜指紋圖譜引入作為中藥質控手段,對生藥培育基地的建設(GAP),對中藥生產工藝的改進和規范(GMP)及中藥成品的質量控制(GLP)都產生深遠影響。
(一)建立指紋圖譜的一般原則:
中藥指紋圖譜的建立,應以系統的化學成分研究和藥理學研究為依托,體現系統性、特征性和穩定性三個基本原則。唯此,才能保證指紋圖譜的標準化、規范化、客觀化,從而便于推廣和應用。
1.系統性??是指指紋圖譜中反映的化學成分應包括該中藥有效部位所含大部分成分,或指標性成分的全部,如中藥兩頭尖中抗腫瘤的有效成分為皂苷類化合物,則其指紋圖譜應盡可能地反映其中的皂苷類成分;銀杏葉的有效成分是黃酮類和銀杏內酯類,則其指紋圖譜可采用兩種方法,針對這兩類成分分別分析,達到系統全面的目的。
2.特征性??是指指紋圖譜中反映的化學信息(如保留時間)應具有較強的選擇性,這些信息的綜合結果,將能特征性地區分中藥的真偽與優劣,成為中藥自身的“化學條碼”。如北五味子的HPLC指紋圖譜和TLC指紋圖譜,不僅包括多種的五味子木脂素類成分,而且具有許多未知類成分,這些成分的峰位順序、比值在一定范圍內是固定的,并且隨藥材品種不同而產生差異,依此可以很好地區別其來源、產地,判別藥材的真偽優劣。
3.穩定性??是指所建立的指紋圖譜在規定的方法、條件下的耐用程度,即不同操作者、不同實驗室所重復做出的指紋圖譜應在所允許的誤差范圍內,以體現其通用性和實用性。因而要求包括樣品制備、分析方法、實驗過程、數據采集、處理、分析等全過程都要規范化操作,同時,還應建立相應的評價機構,對其進行客觀評價。
(二)建立指紋圖譜的一般步驟
1.方案設計與思路
(1)研究對象的確定
? ?在調研有關文獻、新藥申報資料(質量部分和工藝部分)及其它研究結果的基礎上,盡可能的詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含成分的種類及其理化性質,綜合分析后找出成品中的藥效成分或有效成分,作為成品和中間體指紋圖譜的研究對象,即分析檢測目標。
例如,黃芪含黃酮、皂苷及多糖三類有效組分,黃芪多糖注射液及其中間體的指紋圖譜則以多糖為研究對象,黃芪原藥材的指紋圖譜應把黃酮、皂苷及多糖作為研究對象。
?復方注射劑應根據君臣佐使的原則,以君藥、臣藥中的有效成分作為指紋圖譜的研究對象,佐使藥中的成分可采用其它指紋圖譜方法進行輔助、補充研究。
(2)研究方法的選擇
? ? 研究方法應根據研究對象的物理化學性質來選擇。大多數化合物可采用HPLC。例如黃芪中黃酮、皂苷、多糖等。揮發性成分應采用GC。例如魚腥草中的魚腥草素、土木香中的土木香內酯、異土木香內酯和二氫土木香內酯等。某些有機酸經甲酯化后亦可用GC分析。采用上述方法難以分離檢測的成分,可考慮使用TLC和CE。
? ? 一個中藥制劑的指紋圖譜可以同時采用多種方法進行研究。選擇方法時,還需考慮藥品檢驗系統復核時的設備、技術等因素。
(3)研究內容
根據國家食品藥品監督管理局《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》(暫行)的規定,主要研究內容有原藥材、中間體、注射劑的指紋圖譜,涉及樣品名稱、來源、制備、測定方法、指紋圖譜及技術參數等。
2.樣品的收集
? ? 這是最初也是最關鍵的步驟。至少要收集10個批次樣品。注意樣品的代表性。
? (1)切不可將同一批次樣品分散成數個批次,充當樣品。
(2)原藥材盡可能固定產地(GAP基地藥材,地道藥材)、采收期和炮制方法。對光線穩定,療效穩定,無臨床不良反應的藥材批次應重點選擇。? ?
(3)中間體、注射劑樣品的收集應重點選擇工藝穩定、療效穩定、無不良反應的批次。
? (4)留樣應不少于實驗用量的3倍。
3.供試品溶液的制備(樣品的預處理)
(1)藥材供試液的制備
? 根據所含成分的理化性質,通過溶劑提取、液液萃取、沉淀、吸附等方法,分離富集樣品。例如,黃芪中黃酮類成分通過堿的萃取、皂苷類通過大孔吸附樹脂吸附;苦參中總生物堿通過陽離子交換樹脂分離;揮發性樣品常用水蒸氣蒸餾法制備。
? ? 樣品富集后,還需通過氧化鋁預柱、C18預柱、硅膠預柱、聚酰胺預柱等,除去色素等雜質,最后通過微孔濾膜,供HPLC測試。
(2)中間體供試液制備
可針對有效成分處理,并參照原藥材的制備方法。?
(3)注射劑供試液制備
液體注射劑一般無需特殊處理,可直接分析檢測。
4.參照物的選擇
一般選取樣品中容易獲得且含量較高的一個主要活性成分或指標成分作為參照物(S)。參照物主要用于指紋圖譜技術參數的確定,如特征峰(共有峰)的相對保留時間,峰面積比值等。并有助于圖譜的穩定性、重現性的考查。例如三七藥材的指紋圖譜中以三七皂苷R1為參照物。
由于指紋圖譜比較復雜,內標物不易選擇、插入,故一般不以內標物做為參照物。
5.實驗方法和條件的選擇
其目的是通過比較實驗,從中選取相對簡便易行的方法和條件,獲取足以代表品種特征的指紋圖譜,以滿足指紋圖譜的專屬性、重現性和普遍適用性的要求。方法和條件須經過嚴格的方法學考察。例如穩定性試驗,精密度試驗,重現性試驗等。
注意事項:供試液的制備和色譜分析時均須定量操作,以保證圖譜在整體特征上進行半定量(差異程度或相似程度)的比較。
指紋圖譜分析不同于含量測定,提高其分離度應以不犧牲色譜的整體特征為前提,故不應孤立地苛求分離度達到含量測定的要求。
采用HPLC和GC制定指紋圖譜,記錄時間一般為1小時。(實測2小時)
6.對照指紋圖譜及其技術參數的建立
(1)測得的大量色譜數據需經分析和數據處理,才能獲得對照指紋圖譜(擬合指紋圖譜)及其技術參數,以此作為藥品指紋圖譜檢驗的依據。
(2)技術參數主要包括總峰面積、共有峰序號、參照峰(S)、共有峰相對保留時間(RRT),共有峰峰面積比(RA),非共峰面積等。
RRT=RTi/RTs? ???RA=Ai/As
共有峰亦稱特征峰(包括參照峰),系指所有被檢批次中均含有的相同色譜峰,主要來源于樣品中主要有效成分或指標成分。共有峰的化學歸屬,可采用對照品加入法或HPLC/DAD/MS/MS聯用技術進行鑒別,后者可在無對照品的情況下使用。
7.藥材、中間體和注射劑指紋圖譜的相關性
注射劑中各特征峰均可在藥材及中間體指紋圖譜中得到追蹤,中間體與注射劑的指紋圖譜應非常接近,藥材圖譜中的色譜峰應比注射劑多。必要時可采用加入某一藥材、有效部位或中間體的供試品,或制備某一藥材、有效部位或中間體陰性供試品的方法,標定各指紋圖譜之間的相關性。提供相關性研究的指紋圖譜。
8.指紋圖譜的評價
中藥指紋圖譜的評價系指將樣品指紋圖譜與建立起來的對照指紋圖譜進行相似性比較,從而對藥品質量進行評價和控制。
? ? 中藥指紋圖譜的評價不同于含量測定,它強調的是相似性(Similarity),而不是相同性(Identity),也即著重辨識完整圖譜“面貌”,而不是求索細枝末節。分析比較的結果是對供試品與對照品之間的差異或一致性作出的評價。
相似性的比較可以用“相似度”表達,相似度可借助國家藥典委員會推薦的“中藥指紋圖譜計算機輔助相似度評價軟件”計算,一般情況下相似度在0.9~1.0之間即認為符合要求。
(三) 中藥指紋圖譜的研究現狀
1.國內發展現狀
我國從事中藥指紋圖譜研究最早可以追溯到60年代,如采用薄層色譜、紫外光譜、紅外光譜制定中藥材的指紋圖譜等。但當時人們對此重視不夠,研究速度與成果相對發達國家有一定的差距。近年來,隨著中藥現代化、國際化的深入發展,政府、企業和研究人員越來越清醒地認識到,控制中藥的質量是我們亟待解決的關鍵技術之一,目前全國各科研機構已紛紛進行中藥指紋圖譜的研究。
2.國際發展現狀
在國外,指紋圖譜已列入FDA植物藥產品工業指南(2000年草案稿)、WHO草藥評價指南(1996年)以及英國草藥典(1986)、印度草藥典(1998)、美國草藥典(1999-2001,Monographs)。國外許多研究機構對中藥指紋圖譜的研究主要為建立指紋圖譜與藥效的相關性研究,以及對中藥理論和新藥開發的研究體系和模式。日本把地道藥材飲片配方煎煮得到的煎汁作為標準提取物,標準提取物的指紋圖譜即為標準指紋圖譜,以此對生產的原料、配方、和工藝嚴格控制,使成品指紋圖譜與標準指紋圖譜一致。法國和德國的植物藥劑大多以“標準浸膏”投料,減少了以植物藥為直接原料帶來的不穩定性。德國用指紋圖譜技術控制質量的銀杏制劑,在國際上具有很強的競爭力。
鄭麗萍等采用HPLC法測定燈盞花顆粒中燈盞乙素的含量,以甲醇-四氫呋喃-0.1%磷酸(15:15:70)為流動相,檢測波長為335nm。燈盞乙素進樣量在0.125~0.857ug線性范圍內呈良好的線性關系,回收率為98.1%(RSD=1.3%)。李昌勤等采用HPLC法測定燈盞花素片中野黃芩苷的含量,以甲醇-水-磷酸(40:60:0.5)為流動相,檢測波長為335nm。野黃芩苷在0.165~0.8075ug范圍內,進樣量與峰面積積分值之間線性關系良好,平均回收率為98.7%(RSD=1.26%)。
1.3 本實驗的目的和意義
燈盞花成分的多樣性與復雜性是燈盞花質量評價的難點,闡明所有有效成分是一項極為困難的研究課題。藥材中的單一成分均不能代表原中藥材的全部功效。臨床運用時多以復方形式出現,加之,中藥品種多,來源廣,產地不同,成分有變的特點,更增加了分析的難度。因此建立全面反映內在化學成分的燈盞花指紋圖譜,將更能全面的體現燈盞花成分的復雜性,從而更好地評價燈盞花的內在質量。
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二、研究內容
2.1燈盞花質量標準研究
通過性狀觀察、顯微鑒定,測定水分、總灰分、酸不溶性灰分等,結合指紋圖譜,擬定燈盞花質量標準草案。
2.2構建指紋圖譜
指紋圖譜是指中藥材或中成藥經適當處理后,采用一定的分析手段,得到的能夠標示該中藥主要化學成分特性的色譜或光譜的圖譜。將中藥色譜指紋圖譜引入作為中藥質控手段,對生藥培育基地的建設(GAP),對中藥生產工藝的改進和規范(GMP)及中藥成品的質量控制(GLP)都產生深遠影響。己經獲得國際社會的廣泛認可,可以為中藥進入世界醫藥主流市場,參與國際競爭提供有力的支持。中藥指紋圖譜是一種綜合的、宏觀的和可量化的鑒別手段。
2.3 定性定量鑒定參考峰
根據傳統中醫藥理論中藥作用的特點是多成分、多靶點、多途徑調節人體機能,多成分多組分協同作用的結果。為了更好的控制藥物的質量,提高藥物療效,根據購買的對照品,通過與藥材指紋圖譜中的共有峰進行比較,確定其化學成分歸屬,為藥理藥效及質量控制的研究提供可靠依據。
三、研究材料、方法和手段
3.1材料和儀器
3.1.1材料采集
樣品采集于云南省昆明市尋甸縣、紅河州瀘西縣。
3.1.2儀器與試劑
電子天平、高效液相色譜儀、旋轉蒸發儀、超聲波清洗器等;石油醚、氯仿、乙
酸乙酯、丙酮、甲醇、分析甲醇、分析乙腈、水(高純水)、部分化學成分對照品等。
3.2質量標準研究
通過觀察原植物形態、顯微鑒定、測定水分含量、測定總灰分、酸不溶灰分、浸出物等。
3.3構建指紋圖譜
3.3.1參照物溶液的制備
精密稱取野黃芩苷對照品適量,加甲醇制成1ml含0.02mg的溶液,作為參照物溶液。
3.3.2供試品溶液制備方法的考察
分別對藥材的粒度、提取方法、提取所用溶媒的種類和用量進行考察。
3.3.2.1藥材粉碎粒度的考察
取藥材樣品,用微型植物粉碎機粉碎過40、60、80、100目篩,精密稱取100mg,置100ml量瓶中,分別加入50%甲醇80ml超聲提取40min,放冷,加50%甲醇至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45um)濾過,取續濾液10ul進樣,測定峰面積,采用外標法計算野黃芩苷的含量對藥材粉碎粒度進行考察。
3.3.2.2提取方法的考察
取藥材樣品,用微型植物粉碎機粉碎過(據以上考察)目篩,精密稱取100mg,加入50%甲醇80ml,分別采用超聲法和回流的方法提取,放冷,加50%甲醇至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45um)濾過,取續濾液10ul進樣,測定峰面積,采用外標法計算野黃芩苷的含量對提取方法進行考察。
3.3.2.3提取溶劑的考察
取藥材樣品,用微型植物粉碎機粉碎過(據以上考察)目篩,精密稱取100mg,分別加入30%、50%、70%甲醇各80ml(據以上考察)方法提取40min,放冷,加溶劑至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45um)濾過,取續濾液10ul進樣,測定峰面積,采用外標法計算野黃芩苷的含量對提取所用溶劑的種類進行考察。
3.3.2.4提取用溶劑量的考察
取藥材樣品,用微型植物粉碎機粉碎過(據以上考察)目篩,精密稱取100mg,分別加入甲醇20ml、40ml、60ml(據以上考察)方法提取40min,放冷,加(據以上方法考察)甲醇至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45um)濾過,取續濾液10ul進樣,測定峰面積,采用外標法計算野黃芩苷的含量對提取溶劑的量進行考察。
3.3.3色譜條件的考察
3.3.3.1色譜柱的考察
分別取10ul參照物溶液、供試品溶液注入裝有不同色譜柱的高效液相色譜儀,從柱效、達基線分離峰的情況考察色譜柱的優劣,選出最適合的色譜柱。
3.3.3.2檢測波長的考察
本實驗采用HPLC法對供試品溶液分別在254nm、270nm、335nm、360nm處進行測定,對檢測波長進行考察。
3.3.3.3流動相的考察
中國藥典以及文獻中都有報道HPLC法測定野黃芩苷含量的色譜條件,設計4種流動相進行考察。
3.3.3.4洗脫方式的考察
在確定了流動相的組成后,照測定法對單一配比及梯度配比系統進行考察。
3.3.4燈盞花藥材指紋圖譜的建立
3.3.4.1共有峰的確定
取10批次樣品同法制備供試品溶液,測定每批的色譜圖,通過相似度軟件對色譜峰進行匹配,確定共有峰。
3.3.4.2方法學驗證
精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液10ul進樣,連續進樣6次,計算各色譜峰相對保留時間、相對峰面積及相對標準偏差。
穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液10ul進樣,分別在2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h進樣一次,計算各色譜峰相對保留時間、相對峰面積及相對標準偏差。
重現性試驗:取同一批樣品,按確定方法制備供試品溶液6份,分別精密吸取10ul進樣,計算各色譜峰相對保留時間、相對峰面積及相對標準偏差。
3.4定性定量鑒定參考峰
根據購買的對照品及藥材按指紋圖譜研究中制定的檢測方法進行檢測,通過保留時間的對比確定共有峰的歸屬。
四、實驗條件
4.1技術支撐
本課題組中藥材研究所團隊的老師具有豐富的實驗所需的知識、經驗和技術手段。具備較強科研精神和能力,能夠按質按量達到預期目的。
4.2實驗儀器
云南農業大學具有完成實驗所需的儀器。
4.3文獻資料
云南農業大學圖書館提供提供實驗所需的資料。
五、研究進度安排(包括論文撰寫)
2010年9月-2011年6月 相關文獻的查閱,實驗方案的設計
2011年7月-2012年7月 采樣、進行實驗
2012年8月-2012年12月 相關數據的整理分析
2013年1月-2013年5月 撰寫畢業論文
六、預期結果
6.1 預期結果
(1)建立燈盞花質量標準;
(2)建立燈盞花的指紋圖譜;
(3)定性定量鑒定參考峰。
6.2創新點
本實驗首次對燈盞花地上、地下部分分別研究,并分別構建指紋圖譜,通過對照品與指紋圖譜中各成分高效液相色譜圖的比較,確定指紋圖譜中多個峰的歸屬,對藥材質量控制提供依據。
七、論證意見
(選題指導思想及難易程度,研究內容、技術路線、方法,可行性及修改建議。是否通過開題報告)
參加論證人員姓名、職稱:
姓名
職稱
姓名
職稱
會議主持人簽名:
年 月 日
八、導師意見
同意開題,請認真組織實施。
簽名: 年 月 日
九、碩士點意見
碩士點負責人簽名: 年 月 日
十、分管院領導意見
簽章 年 月 日




